2013年檢驗主管技師考試：自然殺傷細胞的檢測

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      2012年衛(wèi)生資格考試已經(jīng)結(jié)束，新一輪的考試即將到來，環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)整理出2013年檢驗主管技師考試：自然殺傷細胞的檢測。

　　NK細胞表面至少存在CD2、CD11b、CD11c、CD16、CD56和CD69等多種抗原，但均非NK細胞所特有，因此現(xiàn)今極少以CD系列抗原為指標鑒定和計數(shù)NK細胞，而多檢測NK細胞活性。NK細胞株作為靶細胞，而測小鼠NK細胞活性則用YAC細胞株，檢測方法多種多樣，各有其優(yōu)缺點。

　　(一)酶釋法

　　檢測原則是將一定比例的效應(yīng)細胞和靶細胞共溫一段時間后，離心沉淀，取上清液檢測靶細胞遭破壞后釋放的乳酸脫氫酶或堿性磷酸酶含量。本法經(jīng)濟、快速簡便，但可定量。缺點是靶細胞內(nèi)堿性磷酸酶含量低或因某些未死亡細胞能自行釋放，從而影響法靈敏度和特異性。此外乳酸脫氫酶分子較大，僅當靶細胞膜完全被破壞時才釋放，故不能較早地反映效應(yīng)的功能。

　　(二)形態(tài)法

　　檢測原則是將效應(yīng)細胞與靶按一定比例混合共育，繼而臺盼藍或伊紅Y等活細胞拒染的染料處理，然后分別計數(shù)著染的死細胞和不著染的活細胞，由此推算NK的細胞的殺傷活性。本法簡便，易于掌握，但判斷死細胞與活細胞不免帶有檢測者的主觀因素，也無法計數(shù)輕微損傷的細胞。

　　(三)化學(xué)發(fā)光法

　　檢測原則是當效應(yīng)細胞與靶細胞接觸時，效應(yīng)細胞呼吸爆發(fā)，生成極不穩(wěn)定的O2-和OH-等，放出光子，在發(fā)光劑存在的條件下，可被電倍增管接受和計數(shù)，發(fā)光量與NK細胞殺傷能力相關(guān)。

　　總之，檢測NK細胞活性的方法多種多樣，方法的簡繁有很大差異，但敏感性和特異性亦異，從簡單的活細胞計數(shù)直至最先進的流式細胞儀分析，一般可根據(jù)實驗要求和具體條件選用。

　　(四)熒光法

　　檢測原則是用熒光素標記靶細胞，經(jīng)與效應(yīng)細胞共溫后，離心法上清，用熒光計檢測剩余的活靶細胞的熒光，缺點是活細胞釋放的熒光常被效應(yīng)細胞和培養(yǎng)液等所粹滅。另外，熒光分析法常遇細胞自然釋放率高，熒光本底強，影響靈敏度。為克服上述障礙，用時間分辨熒光免疫分析，將靶細胞用鑭系元素銪(Eu3+)的螯合物標記，按同法與效應(yīng)細胞共溫后，用時間分辨熒光計檢測熒光，可除去非特異性熒光本底。本法實驗時間短，效靶細胞僅需共溫2h，檢測速度快，特異性強。

　　檢測原則是將效應(yīng)細胞和靶細胞按一定比例混合溫育后，直接檢測靶細胞。分有靶細胞漿釋放法和胞核釋放法。

　　1.胞漿釋放法常用51Cr釋放法。51Cr透過細胞膜與胞漿中小分子蛋白質(zhì)結(jié)合，一旦細胞膜遭破壞，同位素隨蛋白質(zhì)外溢，并且不會被完整的細胞再度攝入。本法操作簡便快速能定量，缺點是自然釋放率高，所需靶細胞數(shù)量多，51Cr半衰期短。近年有用111In(銦)檢測NK細胞活性，優(yōu)點是標記率高，用量微，以γ射線放射，可釋放90%的自身能量，比51Cr高10倍，自然釋放率低，僅為51Cr的一半。

　　2.胞核釋放法常用3H-TdR或125IudR作為DNA合成的前體物，可被攝入靶細胞核內(nèi)。當效應(yīng)細胞和靶細胞共溫后，用胰酸和DNA酶處理可使遭破壞的胞核內(nèi)容物釋放。本法自然釋放率比51Cr低，半衰期較長，方法的敏感性高，故被大多數(shù)實驗室所采用。

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