2011中西醫(yī)執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試備考：特異性血清學檢查

　　特異性血清學檢查$lesson$

　　自病毒分離成功以來，對本病的特異性診斷技術迅速建立，檢測對象已由血清抗體發(fā)展到尿液抗體，由檢測抗體發(fā)展到細胞內抗原和尿中可溶性抗原，檢測方法也日新月異。近來用分子生物學技術如斑點雜交、原位雜交及聚合酶鏈反應(PCR)已試用于EHF的診斷及發(fā)病機理研究。

　　1.免疫熒光技術(IFAT)為常規(guī)方法之一。用間接免疫熒光法檢測患者血清特異性IgM和IgG抗體，前者在第1病日即可檢出，第2病日陽性率88.2%，第3病日達100%;IgG在2病日即可檢出，4～5病日陽性率達75%。直接免疫熒光法，可檢出白細胞及尿沉渣細胞內病毒抗原，用于早期診斷。

　　2.酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)　用雙抗體夾心法檢測可溶性抗原，用竟爭法檢測阻斷抗體，特異、敏感，又可避免需要熒光顯微鏡。EHF-IgM捕獲法ELISA(Mac-ELISA)以不同病日血清IgM檢出率為97.7%，而IFAT法檢出率為88.7%，是一敏感、特異的診斷方法。

　　3.免疫粘附血凝法(IAHA)用于檢測抗體，其抗體滴度與免疫熒光抗體滴度相仿，又可區(qū)別不同類型病毒抗體。環(huán)球網校整理

　　李鎬汪和日本學者合作制出檢測EHF抗體的間接凝集試驗方法，將漢坦病毒結合到硅化物顆粒上，制成直徑為1.8μm的抗原致敏顆粒，與稀釋的待檢血清反應40分鐘可觀察結果，此法簡便易行，非特異反應少，敏感性好。

　　4.反向被動血凝法(RPHA)用于檢測體液病毒抗原，與ELISA法滴度基本一致。

　　5.放射免疫法(RIA)國外用固相放射免疫法與ELISA進行診斷及血清流行病學調查，其敏感性較免疫熒光法高10倍以上。

　　6.空斑減少中和試驗(PRNT)中和抗體是EHFV感染后產生的一種重要抗體，是目前用于病毒血清學分型的主要依據(jù)。本法要求嚴格，操作復雜費時，難以在一般試驗室開展。中和效價的高低與病型輕重有關，即重癥患者低，中型患者較高。

　　7.放射免疫沉淀試驗(RIP)有報告用RIP對83份不同病日患者血清測定，抗EHFV-NP(核蛋白)抗體最早出現(xiàn)，大多在4病日便可測出，其后為抗G2(糖蛋白)，抗G1僅在少數(shù)標本中方能測出。三種病毒結構蛋白抗體滴度也是抗NP最高，抗G1最低。

　　8.應用cDNA探針檢測EHFV-RNA的研究，最近國內外先后獲得了病毒的M、S片段的多個cDNA克隆，可用于制備檢測EHFV核酸的探針。檢測EHF患者血液、尿液和外周血淋巴細胞中的EHFV核酸，具有較好的特異性和較高的敏感性，為發(fā)病機理和診斷研究提供了先進手段。