初級檢驗技師輔導：雜交瘤技術(shù)基本原理

　　初級檢驗技師輔導：雜交瘤技術(shù)基本原理

　　雜交瘤技術(shù)基本原理

　　(1)基本原理：是通過融合兩種細胞而同時保持兩者的主要特征。這兩種細胞分別是經(jīng)抗原免疫的小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞。在選擇培養(yǎng)基的作用下，只有B細胞與骨髓瘤細胞融合的雜交細胞才具有持續(xù)培養(yǎng)的能力，形成同時具備抗體分泌功能和保持細胞永生性兩種特征的細胞克隆。

　　(2)B細胞雜交瘤技術(shù)

　?、偌毎倪x擇和融合：雜交瘤技術(shù)的目的是制備對抗原特異性的單克隆抗體，多發(fā)性骨髓瘤是B細胞系惡性腫瘤，是理想的脾細胞融合對象。

　?、谶x擇培養(yǎng)基的關(guān)鍵成分次黃嘌呤(H)、氨甲蝶呤(A)、胸腺嘧啶核苷(T)，取三者字頭稱HAT培養(yǎng)基。

　　③有限稀釋與抗原特異性的選擇：將融合細胞進行充分稀釋，進行克隆化處理，再將陽性細胞進行再次克隆化，應(yīng)用特異性抗原包被的ELISA找出針對目標抗原的抗體陽性細胞株進行增殖，再進行冰凍，體外培養(yǎng)或動物腹腔接種。

　　(3)T細胞雜交瘤：可分為小鼠細胞雜交瘤和人T細胞雜交瘤。是將激活的細胞與酶缺陷型淋巴瘤細胞融合，通過有限克隆稀釋，獲得特異性表達細胞受體(TCR)或其他功能的雜交瘤細胞。其步驟①淋巴瘤細胞系的選擇;②特異性細胞的制備與活化;③T細胞雜交瘤的篩選。

　　(4)陽性雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)：將陽性雜交瘤細胞進行單細胞分離培養(yǎng)，產(chǎn)生單克隆雜交瘤細胞，經(jīng)2～3次檢測均為陽性的雜交瘤單個細胞，才能進行克隆化培養(yǎng)。陽性雜交瘤細胞應(yīng)保存在-196℃。

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