臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試輔導資料：重組dna技術的原理

　　2013臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試臨近，環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學考試網(wǎng)搜集了一些考試知識點，希望可以幫助大家順利通過考試。

　　一個完整的基因克隆過程應包括：目的基因的獲取，克隆基因載體的選擇與改造，目的基因與載體的連接，重組dna分子導入受體細胞，篩選出含感興趣基 因的重組dna轉(zhuǎn)化細胞。實現(xiàn)上述過程需要一些重要的工具酶，如限制性內(nèi)切核酸酶連接酶等。限制性內(nèi)切核酸酶是一類識別dna特意序列的內(nèi)切核酸酶，它的 作用特異切開雙鏈dna.

　　①目的基因的獲?。和庠椿蛴址Q目的基因，來源于幾種途徑：化學合成、酶促合成cdna，制備的基因組dna及pcr技術。

　　②基因載體的選擇與構(gòu)建：可作為基因載體的dna分子有質(zhì)粒dna、噬菌體dna和病毒dna，它們經(jīng)適當改造后仍具有自我復制能力，或兼有表達外源基因的能力。

　?、弁庠椿蚺c載體連接：連接方式有：黏性末端連接、平端連接和人工接頭連接等。

　　④重組dna導入宿主細胞：外源dna與載體在體外連接成重組dna分子，需將其導入宿主細胞。隨受體細胞生長、增殖，重組dna分子得以復制、擴增。

　　⑤重組體的篩選：鑒定哪一菌落或嗜菌斑所含重組dna分子確實帶有目的基因，即可得到目的基因的克隆，這一過程即為篩選或選擇。

　?、蘅寺』虻谋磉_：在原核或真核表達體系中進行表達，獲得所需要的蛋白質(zhì)。

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